離心機區(qū)帶離心分離法介紹
2020-03-17(1665)次瀏覽
離心機密度梯度區(qū)帶離心法簡稱區(qū)帶離心法,區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。此分離方法的優(yōu)點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性,并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。此分離方法的缺點是:①離心時間較長;②需要制備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
離心機區(qū)帶離心法又可分為差速區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法兩種:
(1)離心機差速區(qū)帶離心法:當不同的顆粒間存在沉降速度差時(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數差)。在一定的離心力作用下,顆粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介質的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數差的顆粒(20%的沉降系數差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質,與顆粒的密度無關,大小相同,密度不同的顆粒(如線粒體,溶酶體等)不能用此法分離。離心管先裝好密度梯度介質溶液,樣品液加在梯度介質的液面上,離心時,由于離心力的作用,顆粒離開原樣品層,按不同沉降速度向管底沉降,離心一定時間后,沉降的顆粒逐漸分開,最后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶,沉降系數越大,往下沉降越快,所呈現的區(qū)帶也越低,離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束,樣品顆粒的密度要大于梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液,其最大密度和濃度可達1.28kg/cm3和60%。此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間
(2)離心機等密度區(qū)帶離心法:離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液面上,或樣品預先與梯度介質溶液混合后裝入離心管,通過離心形成梯度,這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產生梯度的二種方式。離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區(qū)帶,這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態(tài)后,再延長離心時間和提高轉速已無意義,處于等密度點上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時間所影響,提高轉速可以縮短達到平衡的時間,離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關,但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區(qū)帶寬度。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質通常為氯化絕CSCl,其密度可達1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離復合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。
注:湖南湘立科學儀器有限公司是研發(fā)、制造,銷售實驗室離心機系列產品的專業(yè)制造廠家。產品現有:高速離心機,低速離心機,大容量離心機,冷凍離心機等,并可根據客戶需求訂做特殊用途離心機。產品廣泛應用于農業(yè)科學、生物工程、食品、化工、制藥、臨床醫(yī)學、血站血庫、檢驗檢疫、疾控、環(huán)保等科研和生產單位。
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